田國標：豬腸系膜上動脈栓塞模型建立及血液學變化研究
田國標 狄長安 王艷明 金大慶 李衛(wèi)民
【摘要】 目的 制作適合去栓治療的急性腸系膜上動脈栓塞動物模型，研究模型血液學變化;方法 80只成年豬體外制作動物自體血凝塊，采用介入方法將自體血凝塊注入腸系膜上動脈，造成動脈栓塞，通過腹腔鏡觀察腸管血運，觀察栓塞效果，監(jiān)測D2聚體及CK; 結果 80只實驗豬均成功建立急性腸系膜上動脈栓塞致腸缺血模型。栓塞后0.5h、1h、2h腔鏡下觀察腸管缺血情況，隨栓塞時間的延長，腸管損傷逐漸加重，2h時腸管已缺血壞死。栓塞模型建立后CK早期明顯升高，D2聚體持續(xù)上升，并有統(tǒng)計學意義。結論 采用本實驗方法可成功建立適合后續(xù)去栓治療研究的急性腸系膜上動脈栓塞動物模型。D2聚體、CK監(jiān)測，有助于對腸系膜上動脈栓塞診斷。
【關鍵詞】 腸系膜上動脈栓塞;動物模型;D2聚體及CK
腸系膜上動脈栓塞( superior mesenteric artery embolism， SMAE)是指栓子進入腸系膜上動脈，發(fā)生急性完全性血管閉塞。是外科急腹癥中較少見疾病，但該病起病急，進展快，疾病早期無特異癥狀和體征，早期診斷比較困難，病情極其兇險，病死率極高，達70%～100%[1]。預后欠佳。本實驗通過介入方法建立一種適合后續(xù)溶栓或取栓的動物模型，便于該病的研究。腸系膜上動脈栓塞發(fā)生時，血清酶學檢查可見血清LDH、AKP、CK升高。近來發(fā)現檢測D2聚體水平有助于腸系膜上動脈栓塞的診斷。本實驗通過對腸系膜動脈栓塞模型血液中D2聚體及CK檢測，證明D2聚體及CK有助于該病的診斷。
一、材料與方法：
1. 材料：80只成年豬，體重40-60公斤，雌豬60例，雄豬20例，均健康。
2. 方法：
2.1實驗動物處置
實驗用豬術前禁食12 小時，速眠新II注射液0.2ml/kg肌肉注射麻醉后固定手術臺上，氣管插管。腹部消毒，建立氣腹，自臍上置入10mm穿刺器，建立觀察孔，置入腔鏡(便于觀察腸管血運及蠕動情況)。股動脈穿刺區(qū)消毒，行股動脈穿刺，置入超滑導絲，導絲引導下置入RH肝管，選擇進入腸系膜上動脈備用。
2.2血凝塊制作
抽豬自體靜脈20 ml，加入2.5ml 氨基已酸混合均勻，待其自凝。切成長條狀備用。
2.3模型制作
經RH肝管將血凝塊注入腸系膜上動脈，反復造影復查直至栓塞滿意為止(主干遠端及其分支不顯影)。
2.4觀察指標
2.4.1自腔鏡觀察0.5h、1h、2h腸管缺血情況。
2.4.2 分別于栓塞前、栓塞0.5h、1h、2h抽豬靜脈血查D2聚體水平及CK。40例.栓塞前靜脈運用肝素12500u。40例栓塞前不運用肝素。
2. 5 統(tǒng)計學方法
監(jiān)測D2聚體水平及CK，數據采用SPSS 17. 0 統(tǒng)計軟件處理，結果用x ± s 表示，多組間比較采用完全隨機設計的單因素方差分析。P < 0. 05 表示差異有統(tǒng)計學意義，P <0. 01 表示有極顯著差異。
二、 結果：
實驗中80頭豬均成功建立腸系膜上動脈栓塞模型，并成功采集血液樣本。
1、腸系膜上動脈栓塞模型情況
腔鏡下觀察：a 栓塞前腸管紅潤，蠕動良好。b栓塞半小時后，腸管顏色無明顯改變，漿膜表面有少量滲出，蠕動減慢：c栓塞1小時后，腸管蠕動消失，漿膜顏色蒼白，可見較多滲出;d栓塞2小時后，腸管無蠕動，漿膜顏色晦暗，稍黑，剪開腸管，無出血，腸管粘膜蒼白，證實腸管已缺血壞死。
2、D-二聚體變化情況
未用肝素，術前組、術后30 min組、1 h 組、術后2 h 組，Ddimer值兩兩比較均有顯著差異，有統(tǒng)計學意義( P < 0. 01) 。術后各組運用肝素與未運用肝素兩兩比較，均有顯著差異，有統(tǒng)計學意義( P < 0. 01) 。
二、 討論：
腸系膜上動脈栓塞是一種少見的疾病，但其一旦發(fā)生，病情極其兇險，病死率極高。制作與人體相似的腸系膜動脈栓塞模型，為后續(xù)的治療提供一定的平臺，以便總結方法、經驗，指導臨床治療。目前已有多種急性腸缺血的動物模型制作的報道。多數實驗采用兔和老鼠等小動物多用于基礎病理研究，而在影像學診斷及治療方法臨床應用前評價研究則多選擇犬和豬等大動物[3,5,6]。選擇那種動物來制備模型，必須考慮動物的大小與人類具有可比性,腸道血供和對缺血的耐受性應該與人類近似[7]。犬與人類腸系膜血管差異較大，犬的周圍動脈弓和腸壁內存在豐富的側支循環(huán)系統(tǒng)，栓塞腸系膜上動脈不易造成腸管缺血壞死[2]。而豬體積較大，腸系膜血管與人類較相似，故本實驗選擇豬做為制作模型的動物。
制作腸系膜動脈栓塞的方法有多種。早期，主要通過開腹手術、結扎或夾閉腸系膜上動脈建立急性腸缺血動物模型[3,4]。此類方法建立的模型存沒有模擬機體急性腸系膜上動脈栓塞的臨床現實，無法進行后續(xù)溶栓或取栓治療，且創(chuàng)傷較大[8,9]。近些年來，隨著介入放射學的快速開展，開始嘗試微創(chuàng)介入方法建立急性腸缺血動物模型。通過股動脈穿刺選擇性插管至腸系膜上動脈主干或其部分分支 經導管注射栓塞劑建立急性腸系膜上動脈栓塞腸缺血動物模型。常用的栓塞劑有不銹鋼圈、明膠海綿、PVC 微球顆粒等[10,11]。 介入方法建立的急性腸缺血實驗動物模型更接近臨床現實，但運用上述栓塞劑，雖可成功建立缺血模型，但無法取出。這不能運于后續(xù)溶栓、取栓等治療效果的評價。自體血凝塊是目前公認的最客觀 最真實 最理想的栓子，因為其形成過程與血管內血栓形成的過程相似。且自體血凝塊質地疏松，適宜取栓及溶栓等后續(xù)治療。本實驗運用自體血凝塊制作栓子。
以往，腸系膜動脈栓塞模型制備過程中，觀察栓塞效果時，多采用反復開腹觀察腸管血運情況及提取標本，創(chuàng)傷較大 影響對實驗結果的觀察。本實驗采用腹腔鏡技術，建立觀察孔觀察腸管血運情況，最大限度地減少了創(chuàng)傷對動物生理及對實驗結果的影響。
本實驗選用成年豬做為實驗動物，自體血凝塊最為栓子，通過微創(chuàng)介入方法制備腸系膜動脈栓塞模型，并運用腹腔鏡方法觀察效果。此方法創(chuàng)傷小，高度模擬了人體的環(huán)境，成功制備了腸系膜上動脈栓塞模型，并可模擬后續(xù)的取栓、溶栓的后續(xù)治療。此模型的建立，為未接觸或較少接觸腸系膜上動脈栓塞患者治療的醫(yī)師提供操作技巧練習的平臺。
現代影像學對于該病的早期發(fā)現具有明顯的不足，相比之下，血清學及生化檢查具有無創(chuàng)、快速、簡便等優(yōu)勢[12]。D-dimer 是一種纖維蛋白單體的降解產物，由纖維蛋白溶解酶作用于血管內外交聯纖維蛋白所產生。D-dimer 水平的升高在一定程度上反映出繼發(fā)性纖溶活性的增強。D- dimer升高常提示受檢者可能有血栓存在。本實驗中，當栓塞模型建立30分鐘后，D- dimer顯著升高，并隨著栓塞時間延長持續(xù)升高，表明在腸系膜上動脈栓塞時，D- dimer是一項比較敏感指標，有助于該疾病的診斷。實驗發(fā)現，創(chuàng)建模型前經靜脈給予肝素抗凝后，各觀察時期D- dimer值較未加用肝素時均有明顯下降。說明運用肝素可顯著降低D- dimer數值，可間接證明運用肝素可有效的阻止血栓的蔓延，肯定了肝素抗凝在腸系膜動脈栓塞治療中的作用。
據文獻報道，腸系膜上動脈栓塞時，CK會顯著升高。本實驗發(fā)現，栓塞半小時后CK值明顯升高，隨著栓塞時間延長，CK值逐漸降至栓塞前水平。表明CK在栓塞早期顯著升高，在腸系膜動脈栓塞早期診斷中有一定意義。
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